作者：譚笑紅，何靜玲，崔奕文，張莉娜，崔景輝，范阿彥，任華 ，廣州健侖生物科技有限公司

  

【摘要】  目的  比較幾種肺炎支原體IgM(MP-IgM)檢測方法的敏感性、特異性和準(zhǔn)確度，供不同條件的實(shí)驗(yàn)室根據(jù)實(shí)際組合應(yīng)用。方法  酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，金標(biāo)斑點(diǎn)法，冷凝集試驗(yàn)，間接血凝試驗(yàn)，明膠顆粒凝集法。結(jié)果  冷凝集試驗(yàn)與其他四種方法存在顯著性差異。結(jié)論  酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)敏感性最好，金標(biāo)斑點(diǎn)法特異性最好，間接血凝法和明膠顆粒凝集法較實(shí)用，冷凝集試驗(yàn)診斷意義不大。

【關(guān)鍵詞】  肺炎支原體；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；金標(biāo)斑點(diǎn)法；間接血凝試驗(yàn)；冷凝集試驗(yàn);乳膠顆粒凝集法
    
The comparison of the laboratory serologic detections of Mycoplasma pneumonia antibody IgM 檢驗(yàn)地帶網(wǎng)

 

TAN Xiao-hong，HE Jing-ling，CUI Yi-wen，et al.

Department of Clinical Laboratory， the No.210 Hospital of PLA， Dalian 116021，China

【Abstract】  Objective  To compare the sensitivity，specificity and accuracy of serologic detection of Mycoplasma pneumonia antibody IgM (MP-IgM)for different clinical laboratories to choose.Methods  Enzyme linked immunosorbent assay(ELISA);Cold agglutination test(CAT);indirect haemagglutination assay(IHA);polystyrene latex agglutination reaction(PLA);Dot-immunogold method(DIM).Results  There is prominent difference between CAT and the others.Conclusion  The sensitivity of the ELISA is the best，the specificity of the DIM is the best，the IHA and PLA are more practical，and the diagnosis meaning of the CAT is little.

【Key words】  MP；ELISA；CAT；IHA；DIM；PLA

    肺炎支原體 (Mycoplasma pneumoniae，MP)是介于病毒和細(xì)菌之間的一種微生物，是一類能在無生命培養(yǎng)基上生長繁殖的最小原核細(xì)胞型微生物。MP感染可在任何年齡發(fā)生，尤其以5～20歲更多見［1］。MP通過飛沫以氣溶膠微粒的形式傳播，感染后引起肺炎支原體肺炎（Mycoplasmal pneumonia，MPP），每隔3～5年出現(xiàn)一次地區(qū)性流行，占各類肺炎總數(shù)的10%～20%，入伍新兵患肺炎者30%～50%由肺炎支原體引起［2］；約占非細(xì)菌性肺炎的1／3以上［3］。另外還可引起肺外各系統(tǒng)改變，且有死亡病例報(bào)道，已引起臨床關(guān)注。

 

實(shí)驗(yàn)室檢測肺炎支原體IgM(MP-IgM)是確診MPP的有效手段，本文比較了幾種常用檢測方法的敏感性、特異性等指標(biāo)，不同條件的實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)實(shí)際組合應(yīng)用，既為臨床提供更快更準(zhǔn)確的診療依據(jù)，又盡可能減少成本。

 

1  材料與方法

1.1  主要儀器 

TECAN洗板機(jī)和TECAN SPECTRA型酶標(biāo)儀。

1.2  材料 

(1)中澳合作北京美迪科生物技術(shù)有限公司酶免法測定抗肺炎支原體(IgM）試劑盒;(2)美國 ALTRU BIOMEDCAL INC. 快速檢測肺炎支原體MP-IgM金標(biāo)免疫斑點(diǎn)檢測卡;(3)首都兒科研究所間接血凝試劑;(4)富士瑞必歐株式會社(FUJIREBIO INC.)賽樂迪亞-麥可Ⅱ(SERODIA-MYCOⅡ）明膠顆粒;(5)本院臨床確診MPP患者血清100人份，正常人血清100人份。

1.3  方法 

(1)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）；(2)金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法（Dot immunogold method，DIM）；(3）冷凝集實(shí)驗(yàn)（Cold agalutination test，CAT）；(4）間接血凝試驗(yàn)（Indirect haemagglutination assay，IHA）；(5）明膠顆粒凝集實(shí)驗(yàn)（Polystyrene latex agglutination reaction，PLA）。

2  結(jié)果

將臨床確診MPP及正常人各100份血清分別用五種方法進(jìn)行檢測，比較其各種評價(jià)指標(biāo)及與臨床診療的符合情況。分別統(tǒng)計(jì)各方法的真陽性（TP）、假陽性（FP）、真陰性（TN）、假陰性（FN），結(jié)果（見表1），并計(jì)算敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陽性預(yù)測值（+PV）、陰性預(yù)測值（-PV）、陽性擬然比（+LR）和陰性擬然比（-LR）（見表2）。表1  五種方法的測定結(jié)果 例（略）表2  五種方法的六項(xiàng)評價(jià)指標(biāo)（略）
 
    經(jīng)過t檢驗(yàn)，冷凝集試驗(yàn)的敏感度、特異度和準(zhǔn)確度均與其他方法差異有顯著性(P＜0.05);其他四種方法差異沒有顯著性(P>0.05)。結(jié)論：金標(biāo)斑點(diǎn)法的陽性擬然比最高，是確診MPP的最好方法，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)次之;而酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的陰性擬然比最高，是否認(rèn)該病的最好方法；間接血凝法、明膠顆粒凝集實(shí)驗(yàn)僅次于前兩者，較實(shí)用，且明膠顆粒凝集實(shí)驗(yàn)操作簡單，快速；冷凝集試驗(yàn)的臨床診斷價(jià)值不大。

    3  討論

隨著臨床診斷技術(shù)的不斷發(fā)展，證實(shí)肺炎支原體是呼吸道及其他器官感染的重要病因之一，發(fā)病率日益增加并有流行趨勢，臨床重癥病例和肺外并發(fā)癥常有發(fā)生，MP的臨床表現(xiàn)、X線征象均缺乏特異性，且須與病毒性肺炎、軍團(tuán)菌肺炎相鑒別，只能通過實(shí)驗(yàn)室檢查病原體分離陽性和血清學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行鑒別診斷、確診。血清中特異性抗體可通過冷凝集試驗(yàn)（CAT）、間接血凝試驗(yàn)（IHA）、明膠顆粒凝集實(shí)驗(yàn)（PLA）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法(DIM)等方法進(jìn)行測定。

冷凝集試驗(yàn)（CAT）是根據(jù)支原體患者血清中有一種抗紅細(xì)胞I抗原的抗體稱紅細(xì)胞凝集素，能與自身或“O”型人的紅細(xì)胞在0℃～40℃條件下發(fā)生凝集反應(yīng)，37℃時(shí)已凝集的紅細(xì)胞呈可逆性完全分開［4］。發(fā)病后2周，約半數(shù)病例產(chǎn)生抗體，紅細(xì)胞冷凝集試驗(yàn)陽性，滴定效價(jià)在1：32以上，恢復(fù)期效價(jià)4倍增加的意義大。但MPP輕癥陽性率只有30%左右，且50%左右正常人血清中有冷凝集素，只是小于1：10，有時(shí)大葉性肺炎也呈陽性反應(yīng)，尤其是當(dāng)患有下列疾病時(shí)，冷凝集試驗(yàn)亦有較高效價(jià)的陽性反應(yīng)：流行性感冒、傳染性單核細(xì)胞增高癥、錐蟲病、肝硬化、黑水熱、重癥貧血、骨髓瘤、熱帶性嗜酸粒細(xì)胞增高癥、腮腺炎并發(fā)睪丸炎、瘧疾、螺旋體病等［5］。因CAT特異度和敏感度均為最低，因此其臨床診斷價(jià)值不大。 檢驗(yàn)地帶網(wǎng)

間接紅細(xì)胞凝集反應(yīng)（IHA）一般用綿羊紅細(xì)胞以單寧酸處理，再以MP抗原使之結(jié)合，如加上抗體則可見紅細(xì)胞凝集反應(yīng)，其抗原效價(jià)為32倍左右［6］。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理表明間接血凝試驗(yàn)在臨床應(yīng)用中仍具有較高使用價(jià)值。靈敏度、誤診率、陰性預(yù)測值較高，而特異度、漏診率、陽性預(yù)測值較低，且價(jià)格低廉，適合于發(fā)現(xiàn)病例。

富士明膠顆粒凝集法（PLA）是將肺炎支原體（株）細(xì)胞膜成分致敏人工明膠顆粒，致敏粒子再與人血清中存在的肺炎支原體抗體發(fā)生凝集反應(yīng)。操作簡單、迅速，并盡可能消除紅細(xì)胞載體引起的非特異性凝集，凝集圖像清晰，過夜后再判讀不發(fā)生顯著變化，靈敏度1：320左右，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，適合于早期診斷［7］。

金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法(DIM)是根據(jù)金標(biāo)免疫滲濾原理，利用MP抗原采用免疫滲濾技術(shù)，檢測MP抗體，黃疸、溶血無影響，分泌物、糞便標(biāo)本加生理鹽水離心取上清可以檢測。但是敏感度略低，有漏診的可能；陽性擬然比最高，而且操作簡單快速，是確診MPP的最好方法。 

酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）是Engvall等于1971提出的，此法具有特異、敏感和簡便等優(yōu)點(diǎn)，已用于檢查各種抗體或抗原。Franco等于1980年使用此技術(shù)檢測可疑支原體肺炎病人血清中的特異性抗體，并獲得了滿意結(jié)果。國內(nèi)有人以超聲波粉碎的肺炎支原體菌液為抗原，用ELISA間接法對病人、接觸者及健康人和血清做了研究。近年來，采用μ-鏈捕獲ELISA檢測肺炎支原體特異抗體IgM，在發(fā)病1周內(nèi)即可檢出［6］。該方法的敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、陽性擬然比和陰性擬然比均較好，適合臨床常規(guī)使用。

 

【參考文獻(xiàn)】

1  包瑛.肺炎支原體肺炎的研究進(jìn)展.陜西醫(yī)學(xué)雜志，2002，(10)：35-38.

2  方圻.現(xiàn)代內(nèi)科學(xué).北京：人民軍醫(yī)出版社，1996，850-853.

3  陳灝珠.實(shí)用內(nèi)科學(xué).第十版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1999，416-418.

4  王淑娟.實(shí)驗(yàn)診斷學(xué).北京：北京醫(yī)科大學(xué)、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1991，260-261. 

5  何金昌.檢驗(yàn)結(jié)果的臨床意義.廣州：廣東科技出版社，1985，318.

6  李之桂，范明遠(yuǎn).感染癥免疫診斷技術(shù).北京：科學(xué)出版社，1990，254-267.

7  潘家華.小兒肺炎支原體感染快速診斷及臨床意義.安徽醫(yī)學(xué)1998，2：13-15.